Ristsaastumise vältimiseks töötamise ajal on selle projekteerimise, ehituse ja käitamise juhtimise peamised nõuded järgmised:
1. Laboratooriumi projekteerimine ja ehitamine, ohutu töötamise süsteem või ohutusstandardid peavad vastama kehtiva GG-kvoodi nõuetele; Laboratooriumi bioohutuse GG-üldnõuded; GB19489.
2. PCR jaguneb vastavalt tööetappidele neljaks funktsionaalseks piirkonnaks, nimelt reagentide säilitamise ja ettevalmistamise piirkond, proovi ettevalmistamise piirkond, amplifikatsiooni piirkond ja amplifikatsiooniprodukti analüüsi piirkond. Kui on varustatud reaalajas fluorestsents-PCR-instrument, saab amplifikatsiooni ja tooteanalüüsi alasid ühendada. Iga funktsionaalne piirkond peab olema selgelt tähistatud ning erinevates funktsionaalsetes piirkondades kasutatavaid seadmeid ja esemeid ei tohi segada.
PCR-laboratooriumi õhuvoolu suunda saab läbi viia vastavalt reagentide ladustamis- ja ettevalmistamisalale → proovi ettevalmistamise piirkond → amplifikatsiooniala → amplifitseeritud toote analüüsiala, et vältida amplifitseeritud toodete sisenemist eelvõimendusega alale koos õhuvooluga. Seda saab läbi viia õhurõhu vähendamise teel reagentide hoidmis- ja ettevalmistamisalast → proovi ettevalmistamise piirkond → amplifikatsiooniala → amplifikatsiooniprodukti analüüsi piirkond. Seda saab saavutada väljalaskeventilaatorite, alarõhu väljalaskeseadmete või muude võimalike meetodite paigaldamise abil.
3. Igasse tööpiirkonda sisenemisel tuleb rangelt järgida ühte suunda, see tähendab reagentide hoidmis- ja ettevalmistamisala → proovi ettevalmistamise piirkond → amplifikatsiooni piirkond → amplifikatsiooni produktide analüüsiala. Kasutada tuleks erinevaid tööpiirkondi (näiteks erinevad värvid). Töötajad ei tohi igast tööpiirkonnast lahkudes tööriideid välja võtta.
4. Labori puhastamine peaks toimuma reagentide ladustamis- ja ettevalmistamisala suunas → proovi ettevalmistamise piirkond → amplifikatsiooni piirkond → toote võimendatud analüüsi piirkond. Erinevatel katsealadel peaks olema oma puhastusseadmed, et vältida ristsaastumist.
5. Pärast töö lõppu tuleb tööpiirkond viivitamatult puhastada. Tööpiirkonna laboratooriumi pind peaks vastu pidama kemikaalide nagu naatriumhüpoklorit desinfitseerimisele ja puhastamisele. Ultraviolettkiirgus laboripinna pinnal peaks olema mugav ja tõhus. Kuna ultraviolettkiirguse kiirgus ja kaugus on saastest puhastamise efekti jaoks väga olulised, saab kasutada liikuvat ultraviolettlampi (lainepikkus 254nm) ja pärast töö lõppu saab seda kohandada kiiritama 60–90 cm katselaual. . Kuna võimendatud saadus on vaid mõnesaja või kümnete aluspaaride (bp) ulatuses, pole see UV-kahjustuste suhtes tundlik, seetõttu tuleb UV-kiirgusega võimendatud fragmenti kiiritada pikema aja jooksul, eelistatavalt üleöö.
Reaktiivide ladustamise ja ettevalmistamise ala funktsioonid on järgmised: säilitusreaktiivide ettevalmistamine, reagentide väljastamine ja amplifikatsioonireaktsiooni segu ettevalmistamine, samuti selliste tarbekaupade nagu tsentrifuugitorud ja näpunäited ladustamine ja ettevalmistamine. Materjalid, nagu säilitusreaktiivid ja proovide ettevalmistamiseks kasutatavad tarbekaubad, tuleb transportida otse reagentide hoidmis- ja ettevalmistamisalale ning need ei tohi läbida amplifikatsiooni tuvastamise piirkonda. Komplekti positiivseid kontrollmaterjale ja kvaliteedikontrolli materjale ei tohiks selles piirkonnas hoida, vaid tuleks hoida selles piirkonnas. Proovi töötlemise piirkond.
Proovi ettevalmistamise piirkonna funktsioon on: nukleiinhappe (RNA, DNA) ekstraheerimine, säilitamine ja amplifikatsioonireaktsiooni tuubi lisamine. Kliinilisi proove hõlmavate toimingute puhul tuleks täita nõudeid kaitsevahenditele, isikukaitsele ja bioloogilise ohutuse teiseste laborite tööspetsifikaatidele. Kuna proovide segamise ja nukleiinhapete puhastamise ajal võib esineda saastumist aerosoolidega, võib selles piirkonnas luua positiivse rõhu tingimused, et vältida naaberpiirkondade aerosoolide saastumist. Proovide ristsaastumise vältimiseks tuleb pärast uuritava nukleiinhappe lisamist katta reaktsioonitoru, mis sisaldab reaktsioonisegu. Potentsiaalselt nakkusohtlike materjalide korral tuleb kaas avada bioloogilise ohutuse kapis ning proovide käitlemiseks ja inaktiveerimiseks peavad olema selged protseduurid.
Amplifikatsioonitsooni funktsioon on: DNA süntees, DNA amplifikatsioon ja tuvastamine. Aerosoolide põhjustatud reostuse vältimiseks tuleks piirkonnas kõndimist minimeerida. Tuleb märkida, et selles piirkonnas ei tohi avada kõiki testitud reaktsioonitorusid.
Amplifitseeritud toote analüüsiala funktsioon on: amplifitseeritud fragmentide täiendav analüüs ja määramine, näiteks hübridiseerimine, ensüümide lagundamise elektroforees, suure jõudlusega vedelikuanalüüsi detekteerimine, järjestamine jne. Nukleiinhappe amplifikatsiooniproduktidel on erinevad analüüsimeetodid, näiteks sondi hübridiseerimismeetodid. membraanidel või mikroplaatidel või laastudel (radionukliidide märgistamine või mitteradioaktiivsete nukliidide märgistamine), otsene või lagundatud agaroosgeeli elektroforees, polüakrüülamiidi geelelektroforees, lõunapoolne ülekanne, nukleiinhapete sekveneerimise meetodid, massispektromeetria jne.
Amplifikatsiooniprodukti analüüsipiirkond on PCR-laboratooriumis peamine amplifikatsiooniprodukti saastumise allikas, seetõttu tuleks olla ettevaatlik, et vältida amplifikatsiooniprodukti väljatoomist selles piirkonnas asuvate toodete ja tööriiete kaudu. Kui amplifitseeritud toodete tuvastamiseks kasutatakse PCR-ELISA meetodit, tuleb plaatide pesemiseks kasutada plaadipesurit ja jäätmevedelik tuleb koguda 1 mooli / L HCl-i ning seda ei saa laborisse valada, vaid see tuleb minema visata. PCR laborist. Tilk. Kasutatud ots tuleb samuti leotada 1 mooli / l HCl-s ja seejärel asetada prügikotti hävitamiseks vastavalt protseduuridele, näiteks tuhastamisele. Kuna selles piirkonnas võib kasutada teatud geneetilisi mutatsioone ja toksilisi aineid nagu etiidiumbromiid, akrüülamiid, formaldehüüd või radionukliidid jne, tuleks eksperimentide ohutuse kaitsele pöörata tähelepanu.